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IP / Pull down Beads標簽抗體分子互作試劑盒基因表達產品內參抗體分子互作單品
Ni-NTA His-Tag Purification Agarose Resin


  產品名稱
  貨號
  儲存條件
其他

 Ni-NTA His-Tag Purification Agarose Resin

 (His標簽蛋白瓊脂糖純化樹脂

  FI8305-1mL  4℃(避免凍存),2年



 Ni-NTA His-Tag Purification Agarose Resin

 (His標簽蛋白瓊脂糖純化樹脂

  FI8305-5mL  4℃(避免凍存),2年


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18927549347




His標簽蛋白瓊脂糖純化樹脂產品信息


His標簽蛋白瓊脂糖純化樹脂以高度交聯的6%瓊脂糖凝膠為基質,通過化學方法偶聯四配位的氮川三乙酸(NTA)為配體,螯合鎳離子(Ni2+)后,形成非常穩定的八面體結構,鎳離子處于八面體的中心,這樣的結構可保護鎳離子免受小分子的進攻,更加穩定,可以耐受一定濃度的還原劑、變性劑或耦合劑等苛刻條件。該產品可在相對較高的流速下,實現對目的蛋白的純化。



His標簽蛋白純化樹脂產品屬性


 基質高度交聯的 6%瓊脂糖凝膠
粒徑45-165 μm
 耐壓0.3 Mpa
載量>40 mg 6×His標簽融合蛋白 / mL 基質
儲存緩沖液
含 20%乙醇的 1×PBS




His純化樹脂使用案例


輝駿生物His標簽蛋白瓊脂糖純化樹脂-快速純化 高純度,his純化樹脂可在相對較高的流速下,實現對目的蛋白的純化




小量蛋白純化操作方法(參考)

 
1. 樣本準備(以大腸桿菌表達的蛋白純化為例)
(1)挑取單菌落到含有適合抗性的LB培養基中,根據載體說明加入相應的誘導劑誘導相應的時間。
(2)表達結束后,將培養液轉至離心瓶,7000 rpm,離心15 min,收集菌體,然后加入菌液體積1/10的裂解緩沖液(添加PMSF,終濃度為1 mM),也可同時加入其他蛋白酶抑制劑,但不能影響目的蛋白與樹脂的結合。
(3)之后加入溶菌酶,使其工作濃度為1 mg/mL。
注:如果表達的宿主細胞內含pLysS或pLysE,可以不加入溶菌酶。
(4)將菌體沉淀懸浮起來(如果菌液濃度高,可考慮加入10 μg/mL RNase A和5 μg/mL DNase I),混勻,置于冰上超聲破碎細胞,至菌液基本保持澄清。
(5)收集上述澄清蛋白液至離心管中,10000 rpm,4℃離心20~30 min。取上清,置于冰上備用或 - 20℃保存。


2. His標簽融合蛋白純化
(1)  根據蛋白表達量取適量體積的 His純化樹脂至尖底離心管中,加入5倍樹脂體積的漂洗緩沖液,顛倒混勻30次,500 g離心5 min,棄上清。
(2)  重復漂洗一次,500 g離心5 min,棄上清。
(3)  向樹脂中加入含His融合蛋白的大腸桿菌裂解液(總體積不要超過離心管體積的2/3),放混勻儀上4 ℃孵育2~4 h。
(4)  4 ℃ 500 g離心5 min,棄上清。
(5)  加入10倍樹脂體積漂洗緩沖液,顛倒混勻30次,4 ℃ 500g離心5 min,棄上清;重復該漂洗操作兩次,500 g離心5 min,棄上清。


3. 洗脫
(1)  SDS-PAGE上樣緩沖液洗脫法(變性洗脫法):得到的蛋白樣品適合SDS-PAGE電泳或Western Blot檢測。加入50 μL 2×SDS-PAGE上樣緩沖液,95oC加熱5分鐘。4 ℃ 12000 g離心 5 min,收集上清至新的離心管中。
(2)  非變性洗脫法:洗脫后的蛋白保持原有的生物活性,便于后續檢測(例如SDS-PAGE、Western-blot質譜實驗等)。每10 μL樹脂,加入10 μL洗脫緩沖液,渦旋震蕩20 s,放混勻儀上室溫洗脫10~15 min,渦旋震蕩20 s;4 ℃ 12000 g離心 5 min,收集上清至新的離心管中,- 80℃保存或直接用于后續實驗。




注意事項


1.  本產品僅限于科學研究使用,不得用于臨床診斷或治療。
2.  為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


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