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IP / Pull down Beads標簽抗體分子互作試劑盒基因表達產品內參抗體分子互作單品
Glutathione Agarose Resin
  產品名稱
  貨號
  儲存條件
其他

  Glutathione Agarose Resin

(GST標簽蛋白瓊脂糖純化樹脂

  FI8304-1mL  4℃(避免凍存),2年



  Glutathione Agarose Resin

(GST標簽蛋白瓊脂糖純化樹脂

  FI8304-5mL  4℃(避免凍存),2年


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Glutathione Agarose Resin(GST標簽蛋白純化樹脂)產品信息


GST標簽蛋白瓊脂糖純化樹脂是一種將還原型谷胱甘肽(Glutathione)鍵合在瓊脂糖微球上形成的親和層析分離介質。該產品保留了天然多糖化合物極好的親水性及大網架結構,與生物活性大分子有很好的相容性,具有高動態吸附容量,快流速操作等特點,用于谷胱甘肽轉移酶標記蛋白(GST 融合蛋白)、谷胱甘肽轉移酶(GST)和谷胱甘肽依賴蛋白的分離純化。




谷胱甘肽瓊脂糖樹脂產品屬性


 基質高度交聯的 4%瓊脂糖凝膠
粒徑45-165 μm
 耐壓0.3 Mpa
載量>40 mg GST標簽融合蛋白 / mL 基質
儲存緩沖液
20%乙醇




谷胱甘肽瓊脂糖樹脂(GST純化樹脂)使用案例


輝駿生物谷胱甘肽瓊脂糖樹脂(GST純化樹脂)快流速操作 相容性好 高吸附量




小量蛋白純化操作方法(參考)

 
1. 樣本準備(以大腸桿菌表達的蛋白純化為例)
(1)挑取單菌落到含有適合抗性的LB培養基中,根據載體說明加入相應的誘導劑誘導相應的時間。
(2)表達結束后,將培養液轉至離心瓶,7000 rpm,離心15 min,收集菌體,然后加入菌液體積1/10的裂解緩沖液(添加PMSF,終濃度為1 mM),也可同時加入其他蛋白酶抑制劑,但不能影響目的蛋白與樹脂的結合。
(3)之后加入溶菌酶,使其工作濃度為1 mg/mL。
注:如果表達的宿主細胞內含pLysS或pLysE,可以不加入溶菌酶。
(4)將菌體沉淀懸浮起來(如果菌液濃度高,可考慮加入10 μg/mL RNase A和5 μg/mL DNase I),混勻,置于冰上超聲破碎細胞,至菌液基本保持澄清。
(5)收集上述澄清蛋白液至離心管中,10000 rpm,4℃離心20~30 min。取上清,置于冰上備用或 - 20℃保存。


2. GST標簽融合蛋白純化
(1)  根據蛋白表達量取適量體積的 GST純化樹脂至尖底離心管中,加入5倍樹脂體積的漂洗緩沖液,顛倒混勻30次,500 g離心5 min,棄上清。
(2)  重復漂洗一次,500 g離心5 min,棄上清。
(3)  向樹脂中加入含GST融合蛋白的大腸桿菌裂解液(總體積不要超過離心管體積的2/3),放混勻儀上4 ℃孵育2~4 h。
(4)  4 ℃ 500 g離心5 min,棄上清。
(5)  加入10倍樹脂體積漂洗緩沖液,顛倒混勻30次,4 ℃ 500g離心5 min,棄上清;重復該漂洗操作兩次,500 g離心5 min,棄上清。


3. 洗脫
(1)  SDS-PAGE上樣緩沖液洗脫法(變性洗脫法):得到的蛋白樣品適合SDS-PAGE電泳或Western Blot檢測。加入50 μL 2×SDS-PAGE上樣緩沖液,95oC加熱5分鐘。4 ℃ 12000 g離心 5 min,收集上清至新的離心管中。
(2)  非變性洗脫法:洗脫后的蛋白保持原有的生物活性,便于后續檢測(例如SDS-PAGE、Western-blot質譜實驗等)。每10 μL樹脂,加入10 μL洗脫緩沖液,渦旋震蕩20 s,放混勻儀上室溫洗脫10~15 min,渦旋震蕩20 s;4 ℃ 12000 g離心 5 min,收集上清至新的離心管中,- 80℃保存或直接用于后續實驗。




注意事項


1.  本產品僅限于科學研究使用,不得用于臨床診斷或治療。
2.  為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


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