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服務介紹

lncRNA與microRNA互作概述


lncRNA (Long non-coding RNA)即長鏈非編碼RNA,通常長度在200-100000 nt,具有5’帽子和3’polyA尾巴結構。

lncRNAs作用范圍廣泛,機制非常復雜,可以與DNA、RNA、蛋白質互作,參與表觀、轉錄、轉錄后等多個層面的調控,在生命活動中有重要作用。lncRNA與miRNA的結合是其重要的調控方式之一,lncRNA作為“miRNA海綿”,抑制miRNA與mRNA的結合,促進mRNA表達,該機制被稱為ceRNA調控機制。





lncRNA與microRNA互作服務信息


目前主要有兩類方法用于研究lncRNA與microRNA的互作,一是雙熒光素酶報告基因法,二是RNA pull down法。


lncRNA與microRNA互作技術服務
技術類型
技術目標技術原價格
雙熒光素酶驗證lncRNA與miRNA結合將待測lncRNA序列構建到熒光素酶基因的下游,該質粒與miRNA mimics共轉染待測細胞;如果miRNA能夠結合lncRNA,則會抑制上游熒光素酶表達,使熒光素酶催化底物的光強減弱,根據化學發光值判斷miRNA是否與待測lncRNA結合








雙熒光素酶驗證ceRNA機制將待測mRNA的3’UTR序列構建到熒光素酶基因的下游,該質粒與miRNA mimics、lncRNA表達載體共轉染待測細胞;與lncRNA空載對照組相比,當轉入lncRNA表達載體時,miRNA對靶基因3’UTR的調控減弱,說明三者間存在ceRNA調控
外源性RNA pull down驗證lncRNA與miRNA結合體外轉錄帶有生物素標記的lncRNA,并與樣本裂解液孵育,之后利用鏈霉親和素磁珠捕獲體外條件下結合的靶lncRNA-miRNA復合物,采用qPCR技術檢測待測的miRNA
內源性RNA pull down
驗證lncRNA與miRNA結合將自主研發的特異性RNA標簽與目標lncRNA構建融合表達載體,轉染細胞使其融合表達,通過與特異性RNA標簽結合的親和介質,將RNA標簽-lncRNA與miRNA的復合體純化出來,采用qPCR法檢測待測miRNA


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lncRNA與microRNA互作服務優勢


1

十年服務經驗,眾多服務案例,服務成果得到優秀期刊認可


2
自有分子及細胞生物實驗平臺,能有效制定并執行最優的實驗路線


3
售后技術支持將一直保持到客戶發表文章,確保客戶安心進行下游實驗及投稿






lncRNA與microRNA互作研究案例


lncRNA-miRNA互作文獻圖.png


研究背景


肝細胞癌(HCC)極易發生轉移。TGF-β誘導的上皮-間充質轉化(EMT)在癌細胞擴散中的作用已被證實,但lncRNAs在TGF信號轉導中的作用仍不清楚。




研究路線


1
2

?對HCC細胞和TGF-β誘導HCC細胞的基因表達檢測發現lncRNA-ATB表達水平較高

?RIP、RNA pull down、雙熒光素酶和基因表達實驗證實對EMT和腫瘤侵襲有抑制作用的miR-200家族可結合lncRNA-ATB

3
4

?表達檢測和熒光素酶實驗表明lncRNA與ZEB1或ZEB2競爭結合miR-200s,三者存在ceRNA調控

?細胞實驗、肝組織檢測和小鼠模型實驗均表明lncRNA-ATB通過上述ceRNA作用誘導EMT并促進癌細胞侵襲

5
6

?RIP、RNA pull down等實驗篩選并確定了與lncRNA-ATB結合的mRNA“IL-11”

?細胞實驗、肝組織檢測和小鼠模型實驗均表明lncRNA-ATB以不依賴于miR-200s的方式促進IL-11 mRNA穩定性,進而激活STAT3信號,促進癌轉移




研究結論


TGF-β激活的lncRNA(lncRNA-ATB)在肝細胞癌(HCC)轉移中上調,并與不良預后相關。本研究從兩個方向揭示了lncRNA促進HCC轉移的機制:(1)lncRNA-ATB通過競爭性結合miR-200家族上調ZEB1和ZEB2,誘導EMT和侵襲;(2)lncRNA-ATB通過結合IL-11mRNA、自分泌誘導IL-11和觸發STAT3信號,促進癌細胞轉移到其它部位。


 

客戶文獻


Yuan J.H. et al: A Long Noncoding RNA Activated by TGF-b Promotes the Invasion-Metastasis Cascade in Hepatocellular Carcinoma. Cancer cell. 2014.




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