當前位置:首頁 > 科研服務 > 分子/細胞生物學 > 細胞生物學 > 啟動子活性檢測(雙熒光素酶實驗)
實驗簡介買此服務常見問答

雙熒光素酶報告基因實驗 * 技術原理


熒光素底物在熒光素酶作用下會發光,且光強度能反應熒光素酶的蛋白表達量。而熒光素酶的蛋白表達量,又和啟動子活性、mRNA的穩定性及翻譯效率等有關。利用這個特點,將待測啟動子、UTR等序列與熒光素酶ORF框融合表達,再檢測其發光強度,就能判斷這些序列對蛋白表達的影響。這就叫熒光素酶報告基因檢測。為了減少實驗誤差,一般會同時轉染一個能穩定表達熒光素酶的質粒作為內參,所以叫雙熒光素酶報告基因檢測。





輝駿生物10年科研服務經驗,專業提供分子互作實驗服務,包括蛋白與蛋白、蛋白與DNA、蛋白與RNA、RNA與RNA的相互作用技術,經驗豐富,實驗結果穩定、可靠。

我公司自有分子、細胞和蛋白實驗平臺,能執行最優的實驗路線。

我們不僅會提供專業的售前方案建議、而且售后技術支持將一直保持到文章發表,確保您安心進行下游實驗及投稿

目前,客戶已在Nature子刊、Oncogene、Cell Research等高水平期刊成功發表大量高分文章(點擊查看客戶文獻)。






雙熒光素酶報告基因實驗 * 技術流程



雙熒光素酶報告基因實驗技術服務_啟動子活性檢測實驗.jpg

圖一:啟動子活性分析示意圖



啟動子與轉錄因子結合驗證外包服務_轉錄因子驗證_雙熒光素酶檢測.jpg

圖二:啟動子和轉錄因子互作分析示意圖






雙熒光素酶報告基因實驗 * 應用背景



雙熒光素酶報告基因分析通常以螢火蟲熒光素酶為報告基因,以海腎熒光素酶為內參基因。所構成的報告系統具有靈敏度高、動態范圍廣、應用靈活等優勢,廣泛應用于基因調控、非編碼RNA靶向互作等研究領域。


輝駿生物根據以下兩種應用制定不同的實驗方案,可針對客戶情況提出合適的建議>>

1. 檢測啟動子活性;

2. 檢測轉錄因子與目標啟動子的相互作用。


?聯系技術支持?
18927549347



雙熒光素酶報告基因實驗 * 服務信息


服務項目服務內容結果交付實驗周期客戶提供價格
啟動子活性分析合成和構建2kb啟動子熒光素酶載體

載體質粒、甘油菌

測序結果實驗報告

5-6周

待測細胞及其培養方法

實驗信息表



構建不同截短啟動子的熒光素酶載體

載體質粒、甘油菌

測序結果實驗報告

細胞培養和雙熒光素酶檢測檢測數據實驗報告
啟動子與轉錄因子結合驗證構建野生型和突變型啟動子的熒光素酶載體

載體質粒、甘油菌

測序結果實驗報告

5-6周

待測細胞及其培養方法

轉錄因子基因質粒模板及其原始測序文件

實驗信息表



構建轉錄因子表達載體

載體質粒、甘油菌

測序結果實驗報告

細胞培養和雙熒光素酶檢測檢測數據和實驗報告





雙熒光素酶報告基因實驗 *?送樣要求


樣本類型建議送樣量
目的基因模板質粒約2ug,或甘油菌約100ul
待測細胞

(廣州市內客戶)可接受活細胞,2個T25瓶,細胞匯合度>80%;

(其他地區客戶)凍存細胞2管。



?聯系技術支持?
18927549347



雙熒光素酶檢測啟動子活性研究案例—客戶文章解析


Tang W.W. et al: The p300/YY1/miR-500a-5p/HDAC2 signalling axis regulates cell proliferation in human colorectal cancer.?

Nature Communications. 2019, IF=12.121.


P300/YY1/miR-500A-5p/HDAC2信號軸調節結直腸癌癌細胞增殖



研究概述


結直腸癌(CRC)是全球癌癥相關性死亡的主要原因之一,復發率和轉移率較高。闡明CRC發生和轉移的機制將有助于尋找新的診斷生物標志物和開發有效的治療干預措施。本研究發現miR-500a-5p在結直腸癌組織中下調,miR-500a-5p水平受到YY1/p300/HDAC2轉錄復合體的協同調控。此外,miR-500a-5p還通過直接結合HDAC2的3’UTR來抑制結直腸癌細胞增殖和遷移。



研究路線

1

細胞和臨床樣本分析顯示miR-500a-5p在CRC中低表達且與其惡行發展有關

2

熒光素酶等實驗證明介導CRC細胞增殖的HDAC2是mR-500a-5p靶標

3

熒光素酶和ChIP-qPCR等實驗證明YY1可以結合miR-500a-5p啟動子并負調控其表達

4

Co-IP、ChIP等實驗表明miR-500a-5p水平還受到YY1/P300HDAC2復合體的調控

5

小鼠模型實驗確定miR-500a-5p表達可顯著抑制胂瘤發展








熱門推薦


蛋白組/代謝組實驗
? iTRAQ 定量蛋白質組學

? Label Free 實驗檢測服務itraq,label free,lc-ms/ms質譜鑒定,DIA實驗,廣泛靶向代謝組學

? LC-MS/MS 蛋白質譜鑒定

? DIA 全息掃描定量蛋白質
??廣泛靶向代謝組學

蛋白/核酸相互作用實驗
? GST pull down

? RNA pull downRNA pulldown,DNA pulldown,GST pulldown.png

? DNA pull down

? Co-IP 免疫共沉淀

? TAP-MS串聯親和純化

分子細胞生物學實驗
? 基因調取/合成 (cDNA克隆)

?熒光定量PCR (qPCR)分子細胞生物學實驗.jpg

? 載體構建實驗服務

?miRNA靶基因驗證
??慢病毒包裝

科研產品
??哺乳動物細胞表達載體慢病毒表達載體 慢病毒干擾載體 人cdna克隆庫.jpg

? 人cDNA克隆庫

? 慢病毒表達載體

? 慢病毒干擾載體

抗體工程服務
??單克隆抗體測序抗體測序 抗體從頭測序 抗體表達.jpg

? 抗體從頭測序

? 抗體表達服務

? 重組抗體表達

實驗試劑盒
? RNA pull down 試劑盒RNA pulldown試劑盒 GST pulldown試劑盒 coip試劑盒 flag試劑盒 .jpg

? GST pull down 試劑盒

? COIP 試劑盒

? Flag 試劑盒






輝駿實力

輝駿實驗外包服務.jpg

4899+客戶已添加微信獲取實驗優惠!

輝駿生物提供的雙熒光素酶報告檢測啟動子活性服務主要分為以下兩種:


1. 啟動子活性分析,用于檢測待測啟動子是否有活性及其活性區域;

2. 啟動子與轉錄因子結合驗證,用于研究某轉錄因子是否調控某基因的待測啟動子,以及它們的結合區域。


Luc(雙熒光素酶報告基因實驗)檢測服務
服務項目服務內容結果交付實驗周期客戶提供價格
啟動子活性分析合成和構建2kb啟動子熒光素酶載體載體質粒、甘油菌、測序結果和實驗報告5-6周

1、待測細胞及其培養方法

2、實驗信息表

(相關基因信息)



構建截短啟動子熒光素酶載體載體質粒、甘油菌、測序結果和實驗報告
細胞培養和雙熒光素酶檢測檢測數據和實驗報告
啟動子與轉錄因子結合驗證合成和構建野生型啟動子熒光素酶載體
載體質粒、甘油菌、測序結果和實驗報告5-6周

1、待測細胞及其培養方法

2、轉錄因子基因質粒模板及其原始測序文件

3、實驗信息表

(相關基因信息)



構建突變型啟動子熒光素酶載體載體質粒、甘油菌、測序結果和實驗報告
構建轉錄因子表達載體
載體質粒、甘油菌、測序結果和實驗報告
細胞培養和雙熒光素酶檢測檢測數據和實驗報告


添加技術員微信溝通實驗
18927549347




雙熒光素酶報告基因實驗*輝駿生物優勢

1

近十年服務經驗,眾多服務案例,服務成果得到優秀期刊認可

2

對啟動子、轉錄因子、miRNA影響熒光素酶表達的具體機制理解深刻,對DNA-蛋白互作方面有獨到見解,擅長針對客戶情況提出合適的方案建議

3

自有分子及細胞生物實驗平臺,能有效制定并執行最優的實驗路線

4

售后技術支持將一直保持到客戶發表文章,確保客戶安心進行下游實驗及投稿




Luc(雙熒光素酶報告基因)技術服務樣本要求


1. 送樣要求


樣本類型建議送樣量
基因模板質粒約2ug,或甘油菌約100ul
待測細胞

(廣州市內客戶)可接受活細胞,2個T25瓶,細胞匯合度>80%;

(其他地區客戶)凍存細胞2管



2. 樣本保存和運輸要求:


(1)質粒或甘油菌可用冰袋保存運輸;

(2)活細胞常溫取樣;

(3)凍存細胞干冰取樣/運輸:需要至少在送樣前一天通知我方。

?




雙熒光素酶檢測啟動子活性結果示例


圖片.png


圖片.png

雙熒光素酶報告基因檢測圖





雙熒光素酶檢測啟動子活性客戶文章


1. Chen R. et al: Lnc-GD2H Promotes Proliferation by Forming a Feedback Loop With c-Myc and Enhances Differentiation Through Interacting With NACA to Upregulate Myog in C2C12 Myoblasts. Front Cell Dev Biol. 2021, IF=6.684.
【研究內容】:本研究采用熒光素酶報告分析、pull?down、ChIP、RIP等方法,研究了新型非編碼RNA(LncRNA)lnc-GD2H在促進C2C12成肌細胞增殖分化和肌肉再生中的作用。結果表明,在成肌細胞增殖和分化過程中,lnc-GD2H的表達增強,且在成肌細胞增殖過程中,lnc-GD2H促進了增殖標記基因的表達,并與c-Myc形成反饋環。在成肌細胞分化過程中,lnc-GD2H與NACA相互作用,減輕NACA對Myog的抑制作用,從而促進Myog的表達,促進分化。這些結果有助于理解lncRNAs調控成肌細胞增殖和分化的機制。
使用相關技術: 啟動子與轉錄因子結合驗證,轉錄因子驗證,雙熒光素酶如何檢測


2. Zhu J.Y. et al: Aryl Hydrocarbon Receptor Promotes IL-10 Expression in Inflammatory Macrophages Through Src-STAT3 Signaling Pathway. Frontiers in Immunology. 2018 , IF=4.716.

【研究內容】:本研究首次大規模鑒定了家蠶絲腺中與絲素基因啟動子區域相互作用的蛋白質,包括絲素重鏈(Fibre?H)、絲素輕鏈(FiBL)和一個25kD的多肽蛋白(P25)。通過DNA?pull?down結合質譜分析,從后絲腺中分別鑒定出198、292和247個或330、305和460個與FibH、FiBL和P25啟動子區域相互作用的蛋白質。此外,在M4和L5D5中分別鑒定出135個和212個蛋白是FibH、FiBL和P25的共同互作蛋白。其中鑒定出31個潛在的轉錄因子,如Y-box和PolyA結合蛋白,它們在核苷酸結合、ATP結合或蛋白質折疊中發揮作用。

使用相關技術: Luc技術服務,啟動子活性分析檢測


4899+客戶已添加微信獲取實驗優惠!

Q:

螢光素酶作為報告基因與熒光蛋白相比有哪些優勢?

A:

螢光素酶的靈敏度比 GFP 高 10-100 倍以上,分析比較的動態范圍更廣。 螢光素酶不需要熒光顯微鏡檢查,在體內實驗中其熒光穿透率高于 EGFP 和其他熒光蛋白,而由于缺乏內源性活性,其背景信號較低。


Q:

雙熒光素酶報告基因實驗轉染效率很低?

A:

如果轉染效率低,可以從三個方面提高。 首先,我們必須確保細胞狀態良好。 通常,我們選擇處于分裂階段的細胞。 或者,可以為過表達的熒光蛋白顆粒選擇陽性對照。 另外,DNA的質量尤為重要,最好先驗證酶切。 本實驗的測試結果非常敏感,有一定的差異是正常的,通常只要確定在一個數量級之內即可。


如果差異超過這個范圍,可以從兩個方面進行改善,一是保持樣品的均勻性,二是準確添加樣品。


Q:

螢火蟲螢光素酶和海腎螢光素酶有什么區別?

A:

1. 底物和輔因子不同: 螢火蟲螢光素酶需要螢光素、氧氣、ATP和鎂離子才能發光; 海腎螢光素酶只需要腔腸素和氧氣。 


2. 燈光顏色不同: 螢火蟲螢光素酶產生的光色為黃綠色,波長為550-570nm; 海腎螢光素酶產生波長為 480nm 的藍光。 


正是由于這兩種酶的底物和發光顏色不同,才被廣泛用于雙熒光素酶報告基因實驗



標簽:

上一篇:暫無

下一篇:慢病毒包裝

你可能感興趣的實驗

電子郵箱

service@prodelecgroup.com

聯系電話

020-32053431 / 400-699-1663

聯系地址

廣州市黃埔區科學城廣州國際企業孵化器D506

微信咨詢

微信掃碼一對一咨詢

服務熱線
4006991663
返回頂部