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服務介紹

穩定細胞株構建技術實驗原理


穩轉細胞株構建是將外源DNA通過質粒轉染或病毒感染的方法導入細胞,實現基因穩定表達或干擾的技術。由于慢病毒可將外源片段穩定整合入宿主細胞基因組,因此特別適合用于穩轉細胞株的構建。慢病毒感染比質粒轉染更容易操作,并且對各類細胞的轉導效率都很高,篩選周期短。


轉入外源基因的細胞選用與載體抗性標簽對應的藥物進行細胞篩選,從而得到可穩定表達/沉默目的基因的細胞株。最常用的抗性篩選標志物有新霉素(neomycin)、潮霉素(hygromycin)和嘌呤霉素(puromycin) 。


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穩定細胞株構建技術實驗流程


穩轉株構建實驗流程.jpg





穩定細胞株構建服務信息


輝駿生物提供的穩轉細胞株構建服務主要分為以下兩種:


穩轉細胞株構建服務
服務項目服務內容結果交付實驗周期客戶提供
表達穩轉株構建構建基因表達慢病毒載體載體質粒、甘油菌、測序結果和報告2-3周

1.細胞及其培養方法

2. 實驗信息表(相關基因信息、載體要求等)

包裝基因表達慢病毒篩選好的表達細胞株、對照細胞株和報告9-10周
感染并篩選穩定表達細胞株
qPCR檢測表達效率檢測結果和報告
shRNA穩轉株構建針對基因序列設計并構建3個shRNA慢病毒載體載體質粒、甘油菌、測序結果和報告2-3周

1.細胞及其培養方法

2. 實驗信息表(相關基因信息、載體要求等)

shRNA質粒轉染293T細胞進行干擾效率檢測干擾效率檢測結果和報告2周
干擾效率最高的shRNA質粒包裝慢病毒 篩選好的shRNA細胞株、對照細胞株和報告9-10周
感染并篩選穩定表達細胞株
qPCR檢測表達效率檢測結果和報告


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穩轉細胞株構建技術服務*輝駿優勢


近十年服務經驗,眾多服務案例,服務成果得到優秀期刊認可

自有分子及細胞生物實驗平臺,能有效制定并執行最優的實驗路線

售后技術支持將一直保持到客戶發表文章,確保客戶安心進行下游實驗及投稿






穩定細胞株構建實驗結果示例


穩定細胞系熒光檢測圖

穩定細胞系熒光檢測圖






穩定細胞株構建-客戶文章


1637896170298984.png  Yang T. et al: CD151 promotes Colorectal Cancer progression by a crosstalk involving CEACAM6, LGR5 and Wnt signaling via TGFβ1. Int J Biol Sci. 2021, IF 6.58.

【研究內容】:研發發現CD151在結直腸癌(colorectal cancer, CRC)組織中表達較高,能促進癌細胞增殖、遷移和侵襲。RNA-seq和CoIP-MS實驗同時檢測和篩選了受CD151表達影響且與CD151相互作用的蛋白質,發現了3個蛋白——TGFβ1,CEACAM6和LGR5。pull down和免疫熒光實驗確定了它們間的相互作用。基因沉默和回復實驗進一步表明,CD151可能通過TGFβ1來促進CEACAM6、LGR5和Wnt通路。

使用技術:shRNA慢病毒載體構建、慢病毒包裝、穩轉細胞株構建



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  Wu M.H. et al: MafF Is Regulated via the circ-ITCH/miR-224-5p Axis and Acts as a Tumor Suppressor in Hepatocellular Carcinoma. Oncol Res. 2020, IF=5.574.

【研究內容】:本研究發現肝癌組織和細胞中MafF(一種轉錄因子)的表達較低。慢病毒介導的MafF過表達抑制HCC細胞增殖并誘導細胞凋亡。生物信息學分析和熒光素酶實驗確定了MafF是miR-224-5p的直接靶點。RNA pull down實驗表明,circ-ITCH可作為miR-224-5p海綿發揮作用。基因表達/回復實驗進一步闡明,MafF的表達和抗腫瘤作用可通過circ-ITCH/miR-224-5p軸調節。本研究證實了MafF在HCC中的抑癌作用,揭示了MafF的上游調控機制,為HCC的潛在治療靶點提供了新的視角。

使用技術:過表達慢病毒載體構建、慢病毒包裝、穩轉細胞株構建


1637896170298984.png  Ma H.H. et al: Pharmacological Properties of the Type 1 Tyramine Receptor in the Diamondback Moth, Plutella xylostella. Int J Mol Sci. 2019, IF=5.923.

【研究內容】:酪胺受體(TAR)可被酪胺(TA)或章魚胺(OA)激活,并已被證明與多種昆蟲的生理調節(如味覺反應、社會組織和學習行為)有關。作者在小菜蛾中新克隆得到一個酪胺受體基因Pxtar1,并在293T細胞中利用慢病毒進行了該基因的穩定表達,功能實驗也顯示酪胺可以激活PxTAR1受體,此外,作者還調查了Pxtar1在小菜蛾體內的表達模式。

使用技術:過表達慢病毒載體構建檢測、慢病毒包裝技術服務、穩轉細胞株構建實驗


1637896170298984.png  He S.L. et al: FAM3B promotes progression of oesophageal carcinoma via regulating the AKT–MDM2–p53 signalling axis and the epithelial‐mesenchymal transition. J Cell Mol Med. 2019, IF=5.31.

【研究內容】:本研究發現FAM3B在人食管鱗狀細胞癌(ESCC)組織中高表達,且與患者不良預后有相關性。慢病毒介導的FAM3B過表達抑制ESCC細胞凋亡,促進ESCC細胞遷移和侵襲。進一步研究證實,FAM3B調節AKT-MDM2-p53通路和EMT的兩個核心標記物Snail和E-鈣粘蛋白。這些發現提示FAM3B可能是ESCC的一個有希望的分子靶點和診斷標記物。

使用技術:慢病毒載體構建技術、慢病毒包裝外包服務、穩轉細胞株構建實驗



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  Sun H. et al: The FEN1 L209P mutation interferes with long-patch base excision repair and induces cellular transformation. Oncogene. 2016, IF=9.867

【研究內容】:FEN1是一種含特殊結構的核酸酶,對維持人基因組的穩定性中有重要作用。本研究發現了與直腸癌相關的新FEN1突變,L209P。該突變缺乏FEN1的側翼內切酶活性、外切酶活性及缺口內切酶活性,但保留了DNA結合特性。體內和體外的基因表達實驗表明,L209P突變能干擾野生型FEN1的功能,且對基因損傷更敏感,從而導致細胞內基因組的不穩定和細胞轉化。

使用技術:慢病毒載體構建技術、慢病毒包裝實驗、穩轉細胞株構建實驗檢測





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