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服務介紹

慢病毒包裝實驗原理


慢病毒(Lentivirus)是以人類免疫缺陷型病毒(HIV)為基礎發展起來的基因工具,已剔除毒性基因,屬于假型病毒,安全性高;它能同時感染分裂細胞和非分裂細胞,可將攜帶的外源基因整合到細胞基因組中實現基因的高效表達。


慢病毒包裝系統由三部分組成:

1. 含有外源基因片段、外源基因的啟動子,以及其它病毒包裝、整合所需的順式作用元件,如HIV-1 的5’LTR 和 3’LTR以及其他輔助元件等。

2. 包裝質粒:共2或3個,分別表達產生病毒包裝所必需的蛋白質(反式作用元件)。

3. 包裝細胞:293T 細胞株,能夠在慢病毒載體和包裝質粒mix 共轉染后包裝出慢病毒


攜帶外源基因的慢病毒載體與包裝質粒共轉染293T包裝細胞,一段時間后收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液,經濃縮和純化的慢病毒液可以用于感染宿主細胞或活體動物。


 




慢病毒包裝實驗服務流程


慢病毒包裝實驗流程





慢病毒包裝技術優勢

慢病毒為整合型病毒,可實現外源基因或shRNA、miRNA穩定、持久的表達,更適合于基因功能研究

 更高的轉導效率,可以高效的表達外源基因

慢病毒感染率高,適用范圍廣(可感染分裂細胞和非分裂細胞),特別適合于質粒轉染效率低的細胞

 包裝流程簡便,可以一次性獲得大量病毒且滴度高。




 

慢病毒包裝服務信息


輝駿生物提供的慢病毒包裝服務主要分為以下三種:


慢病毒包裝服務
服務項目服務內容
結果交付實驗周期客戶提供
表達慢病毒包裝
表達慢病毒包裝
載體質粒、甘油菌、測序結果和報告2-3周實驗信息表(相關基因信息、載體要求、病毒量要求)
包裝基因表達慢病毒
基因表達慢病毒液和對照慢病毒液3-4周
檢測慢病毒滴度滴度檢測報告
shRNA慢病毒包裝采用客戶提供的shRNA或siRNA序列構建shRNA慢病毒載體載體質粒、甘油菌、測序結果和報告2周
實驗信息表(相關基因信息、載體要求、病毒量要求)
包裝shRNA慢病毒shRNA慢病毒液和對照慢病毒液3-4周
檢測慢病毒滴度滴度檢測報告
3+1 shRNA慢病毒包裝針對基因序列設計并構建3個shRNA慢病毒載體
載體質粒、甘油菌、測序結果和報告2-3周實驗信息表(相關基因信息、載體要求、病毒量要求)
shRNA質粒轉染293T細胞進行干擾效率檢測干擾效率檢測結果和報告2周
干擾效率最高的shRNA質粒包裝慢病毒
shRNA慢病毒液和對照慢病毒液3-4周
檢測慢病毒滴度滴度檢測報告


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慢病毒包裝結果示例

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慢病毒包裝滴度檢測圖






慢病毒包裝實驗服務*輝駿優勢


1

十年服務經驗,客戶成果發表在NatureMethods,Oncogene,Cell Research等高水平期刊上。

2

自有分子及細胞生物實驗平臺,能有效制定并執行最優的實驗路線

3

售后技術支持將一直保持到客戶發表文章,確保客戶安心進行下游實驗及投稿。






慢病毒包裝實驗服務-客戶文章


1637896170298984.png  Yang T. et al: CD151 promotes Colorectal Cancer progression by a crosstalk involving CEACAM6, LGR5 and Wnt signaling via TGFβ1. Int J Biol Sci. 2021, IF 6.58.

【研究內容】:研發發現CD151在結直腸癌(colorectal cancer, CRC)組織中表達較高,能促進癌細胞增殖、遷移和侵襲。RNA-seq和CoIP-MS實驗同時檢測和篩選了受CD151表達影響且與CD151相互作用的蛋白質,發現了3個蛋白——TGFβ1,CEACAM6和LGR5。pull down和免疫熒光實驗確定了它們間的相互作用。基因沉默和回復實驗進一步表明,CD151可能通過TGFβ1來促進CEACAM6、LGR5和Wnt通路。

使用技術:shRNA慢病毒載體構建、慢病毒包裝、穩轉細胞株構建



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  Wu M.H. et al: MafF Is Regulated via the circ-ITCH/miR-224-5p Axis and Acts as a Tumor Suppressor in Hepatocellular Carcinoma. Oncol Res. 2020, IF=5.574.

【研究內容】:本研究發現肝癌組織和細胞中MafF(一種轉錄因子)的表達較低。慢病毒介導的MafF過表達抑制HCC細胞增殖并誘導細胞凋亡。生物信息學分析和熒光素酶實驗確定了MafF是miR-224-5p的直接靶點。RNA pull down實驗表明,circ-ITCH可作為miR-224-5p海綿發揮作用。基因表達/回復實驗進一步闡明,MafF的表達和抗腫瘤作用可通過circ-ITCH/miR-224-5p軸調節。本研究證實了MafF在HCC中的抑癌作用,揭示了MafF的上游調控機制,為HCC的潛在治療靶點提供了新的視角。

使用技術:過表達慢病毒載體構建、慢病毒包裝、穩轉細胞株構建


1637896170298984.png  Ma H.H. et al: Pharmacological Properties of the Type 1 Tyramine Receptor in the Diamondback Moth, Plutella xylostella. Int J Mol Sci. 2019, IF=5.923.

【研究內容】:酪胺受體(TAR)可被酪胺(TA)或章魚胺(OA)激活,并已被證明與多種昆蟲的生理調節(如味覺反應、社會組織和學習行為)有關。作者在小菜蛾中新克隆得到一個酪胺受體基因Pxtar1,并在293T細胞中利用慢病毒進行了該基因的穩定表達,功能實驗也顯示酪胺可以激活PxTAR1受體,此外,作者還調查了Pxtar1在小菜蛾體內的表達模式。

使用技術:過表達慢病毒載體構建檢測、慢病毒包裝技術服務、穩轉細胞株構建實驗


1637896170298984.png  He S.L. et al: FAM3B promotes progression of oesophageal carcinoma via regulating the AKT–MDM2–p53 signalling axis and the epithelial‐mesenchymal transition. J Cell Mol Med. 2019, IF=5.31.

【研究內容】:本研究發現FAM3B在人食管鱗狀細胞癌(ESCC)組織中高表達,且與患者不良預后有相關性。慢病毒介導的FAM3B過表達抑制ESCC細胞凋亡,促進ESCC細胞遷移和侵襲。進一步研究證實,FAM3B調節AKT-MDM2-p53通路和EMT的兩個核心標記物Snail和E-鈣粘蛋白。這些發現提示FAM3B可能是ESCC的一個有希望的分子靶點和診斷標記物。

使用技術:慢病毒載體構建技術、慢病毒包裝外包服務、穩轉細胞株構建實驗



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  He L.F. et al: FEN1 promotes tumor progression and confers cisplatin resistance in non-small-cell lung cancer. Molecular Oncology. 2017, IF=6.603.

【研究內容】:作者發現FEN1在肺癌細胞中高表達,在維持基因組穩定性方面發揮重要作用。慢病毒介導的基因表達實驗發現,FEN1對肺癌細胞增殖來說很關鍵,抑制FEN1會導致DNA復制能力下降和DNA損傷積累,最終引發凋亡。FEN1水平改變還會影響肺癌細胞對化療藥物的響應。小鼠實驗也表明FEN1抑制劑的使用能夠阻礙肺癌發展。因此,該研究指出FEN1的有效利用可能會為肺癌靶向治療提供幫助。

使用技術:慢病毒載體構建、慢病毒包裝


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  Sun H. et al: The FEN1 L209P mutation interferes with long-patch base excision repair and induces cellular transformation. Oncogene. 2016, IF=9.867

【研究內容】:FEN1是一種含特殊結構的核酸酶,對維持人基因組的穩定性中有重要作用。本研究發現了與直腸癌相關的新FEN1突變,L209P。該突變缺乏FEN1的側翼內切酶活性、外切酶活性及缺口內切酶活性,但保留了DNA結合特性。體內和體外的基因表達實驗表明,L209P突變能干擾野生型FEN1的功能,且對基因損傷更敏感,從而導致細胞內基因組的不穩定和細胞轉化。

使用技術:慢病毒載體構建技術、慢病毒包裝實驗、穩轉細胞株構建實驗檢測




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