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服務介紹

載體構建技術實驗原理


載體構建是分子生物學研究中最常用的實驗技術,可用于體外條件下基因(包括mRNA,lncRNA,circRNA,miRNA)的過表達、干擾、突變、插入或缺失實驗,或用于載體改造等。


在基因工程中,常用人工構建的含有多克隆位點和抗性基因的質粒作為載體。首先采用PCR等方法體外擴增外源的目標DNA片段,之后依靠限制性內切酶的切割和DNA連接酶的連接,將外源DNA片段構建到質粒上;質粒轉化大腸桿菌或者轉染細胞,可以使外源DNA片段復制或表達。





載體構建技術實驗流程


1
引物設計與合成


2
PCR擴增目的基因


3
制備線性化載體


4
同源重組連接目的基因和載體


5
轉化大腸桿菌,篩選陽性菌落


6
菌落PCR鑒定、酶切鑒定和測序






載體構建實驗服務信息


駿生物提供的我公司主要的載體類型有:真核表達載體,原核表達載體,慢病毒表達載體,慢病毒干擾載體,circRNA表達載體,熒光素酶報告基因載體,植物表達載體,克隆載體等(請詳詢銷售或客服人員)


項目名稱

客戶提供

結果交付

實驗周

價格
載體構建

待構建的基因模板(也可委托我方全基因合成)
待構建的載體(我方已有的載體可免費提供)
實驗信息表(基因序列,載體要求等)
質粒或甘油菌可用冰袋保存運輸

1、構建好的載體質粒約3ug
2、構建好的載體甘油菌1ml
3、載體圖譜
4、原始測序文件和拼接文件
5、實驗報告

2-4周






添加技術員微信溝通實驗
18927549347





載體構建技術服務*輝駿優勢


1

十年服務經驗,客戶成果發表在NatureMethods,Oncogene,Cell Research等高水平期刊上。

2

自有分子及細胞生物實驗平臺,能有效制定并執行最優的實驗路線

3

售后技術支持將一直保持到客戶發表文章,確保客戶安心進行下游實驗及投稿。







載體構建實驗-客戶文章


1637896170298984.png  Sun C. et al: Oncofetal gene SALL4 reactivation by hepatitis B virus counteracts miR-200c in PD-L1-induced T cell exhaustion. Nat Commum. 2018,IF= 14.919.

【研究內容】:本研究通過基因表達檢測、原位雜交、雙熒光素酶、ChIP等實驗發現HBV相關性肝細胞癌的SALL4或PD-L1表達與miR-200C水平和患者生存期呈負相關,高水平miR-200C直接靶向CD274 (編碼PD-L1)來降低其表達。成年期HBV誘導導致STAT3激活,使SALL4蛋白重新表達,從而抑制miR-200c轉錄。HBV-pSTAT3-SALL4-miR-200C信號通路可調節PD-L1的表達,針對該通路的治療策略可能會逆轉病毒誘導的免疫衰竭。

使用技術:shRNA慢病毒載體構建技術服務、載體構建實驗



1637896170298984.png

  Chen R. et al: Lnc-GD2H Promotes Proliferation by Forming a Feedback Loop With c-Myc and Enhances Differentiation Through Interacting With NACA to Upregulate Myog in C2C12 Myoblasts. Front Cell Dev Biol. 2021, IF= 6.684.

【研究內容】:本研究通過雙熒光素酶,ChIP,DNA pull down和RNA pull down,RIP等實驗發現lnc-GD2H在肌肉再生中的作用:在成肌細胞增殖過程中,c-Myc蛋白與lnc-GD2H啟動子結合并調節其轉錄,促進成肌細胞增殖;在成肌細胞分化過程中,lnc-GD2H與成肌細胞分化相關蛋白NACA相互作用,抑制其在Myog啟動子的富集,減輕NACA對Myog的抑制作用,促進Myog表達和成肌細胞分化。

使用技術:雙熒光素酶載體構建、ChIP、DNA pull down、RNA pull down,RIP


1637896170298984.png

  Fu X.Q. et al: Activation of STAT3 is a key event in TLR4 signaling-mediated melanoma progression. Cell Death Dis. 2020, IF= 8.469.

【研究內容】:本研究通過基因表達/敲除、細胞功能檢測,動物實驗,雙熒光素酶分析等實驗,發現人黑色素瘤中TLR4的表達與STAT3的激活/磷酸化呈正相關,TLR4配體通MYD88和TRIF激活黑色素瘤細胞中的STAT3,促進了腫瘤的生長。當抑制黑色素瘤中STAT3的功能時,TLR4激活產生的效應減弱,說明STAT3激活對TLR4信號介導的黑色素瘤發展至關重要,為黑色素瘤的病理生理學提供了新的線索。

使用技術:基因調取檢測服務、真核表達載體構建實驗


1637896170298984.png  Cai X.D. et al: LncRNA ILF3-AS1 mediated the occurrence of epilepsy through suppressing hippocampal miR-212 expression. Aging-US. 2020, IF=5.682.

【研究內容】:本研究通過基因過表達、雙熒光素酶等實驗發現LncRNA ILF3-AS1在顳葉癲癇(TLE)患者的海馬和血清中水平升高,ILF3-AS1通過靶向miR-212誘導炎性細胞因子和MMP3、MMP9的表達。值得注意的是,針對ILF3-AS1/miR212/MMP3/9軸的治療策略可能是治療TLE的有效方法。

使用技術:真核表達載體構建檢測實驗、基因調取外包服務



1637896170298984.png

  Ma H.H. et al: Pharmacological Properties of the Type 1 Tyramine Receptor in the Diamondback Moth, Plutella xylostella. INT J MOL SCI. 2019, IF=5.923.

【研究內容】:酪胺受體(TAR)可被酪胺(TA)或章魚胺(OA)激活,并已被證明與多種昆蟲的生理調節(如味覺反應、社會組織和學習行為)有關。作者在小菜蛾中新克隆得到一個酪胺受體基因Pxtar1,并在293T細胞中利用慢病毒進行了該基因的穩定表達,功能實驗也顯示酪胺可以激活PxTAR1受體,此外,作者還調查了Pxtar1在小菜蛾體內的表達模式。

使用技術:過表達慢病毒載體構建、慢病毒包裝





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