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服務介紹

cDNA克隆技術實驗原理


基因調取和基因合成均是體外獲取目標基因的方法。


基因調取:從細胞或組織中提取總DNA或總RNA后擴增出目的基因;該方法獲得的基因是天然存在的,但由于個體差異,調取到的基因可能存在SNP,即調取到的序列與NCBI等數據庫登錄序列不完全一致。另外,當樣本中目的基因含量較低時,可能調取不成功。


全基因合成:通過化學合成的方法獲得目的DNA序列。該方法簡單,快速,并且可以保證合成后的序列與您要求的序列完全一致,但當片段太長時,合成費用也相對較高。


 



cDNA克隆實驗流程


1. 引物設計與合成

2. RNA提取和反轉錄

3. 以cDNA為模板,采用設計好的引物進行PCR,回收目的片段

4. 連接載體,轉化大腸桿菌細胞,進行菌落PCR驗證、酶切驗證和測序

5. 測序結果分析和出具報告





基因調取/合成cDNA克隆服務信息


項目名稱

客戶提供

結果交付

實驗周

價格
基因調取、合成目標基因序列
其他實驗要求

 

1、基因載體質粒約3ug
2、基因載體甘油菌1ml
3、原始測序文件和拼接文件

4、實驗報告(全基因合成無報告)

2-4周




添加技術員微信溝通實驗
18927549347





基因調取/合成服務優勢*輝駿生物


1
十年服務經驗,眾多服務案例,服務成果得到優秀期刊認可


2
自有分子及細胞生物實驗平臺,能有效制定并執行最優的實驗路線


3
售后技術支持將一直保持到客戶發表文章,確保客戶安心進行下游實驗及投稿






基因調取/合成檢測服務—客戶文章



1637896170298984.png  Fu X.Q. et al: Activation of STAT3 is a key event in TLR4 signaling-mediated melanoma progression. Cell Death Dis. 2020, IF= 8.469. 

【研究內容】:本研究利用基因表達/敲除、細胞功能檢測,動物實驗,雙熒光素酶分析等實驗,發現人黑色素瘤中TLR4的表達與STAT3的激活/磷酸化呈正相關,TLR4配體通過MYD88和TRIF激活黑色素瘤細胞中的STAT3,促進了腫瘤的生長。當抑制黑色素瘤中STAT3的功能時,TLR4激活產生的效應減弱,說明STAT3激活對TLR4信號介導的黑色素瘤發展至關重要,為黑色素瘤的病理生理學提供了新的線索。

使用技術:基因調取、載體構建



1637896170298984.png

  Cai X.D. et al: LncRNA ILF3-AS1 mediated the occurrence of epilepsy through suppressing hippocampal miR-212 expression. Aging-US. 2020, IF=5.682.

【研究內容】:本研究通過基因過表達、雙熒光素酶等實驗發現LncRNA ILF3-AS1在顳葉癲癇(TLE)患者的海馬和血清中水平升高,ILF3-AS1通過靶向miR-212誘導炎性細胞因子和MMP3、MMP9的表達。值得注意的是,針對ILF3-AS1/miR212/MMP3/9軸的治療策略可能是治療TLE的有效方法。

使用技術:載體構建實驗、基因調取服務、cDNA克隆服務


1637896170298984.png

  Rui Y.J. et al: Disruption of MDA5 mediated innate immune responses by the 3C proteins of Coxsackievirus A16, Coxsackievirus A6, and Enterovirus D68. J Virol. 2017, IF= 5.103.

【研究內容】:柯薩基病毒A16 (CV-A16)和A16 (CV-A6),以及腸病毒D68 (EV-D68) 是手足口病(HFMD)和26種小兒呼吸道疾病的主要病因。作者通過基因表達、雙熒光素酶和免疫共沉淀(Co-IP)等實驗發現,這三種病毒的3Cpro蛋白可以與宿主的線粒體抗病毒信號蛋白競爭結合MDA5,從而抑制MDA5下游的RLR信號通路中關鍵因子I型干擾素(IFN)的產生;此外,它還能降解NF-κB信號通路中的關鍵因子TAK1而導致NF-κB失活。本研究揭示了這三種病毒破壞宿主先天免疫應答的新機制。

使用技術:基因調取及表達實驗外包、載體構建技術





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